DNA 的提取与纯化往往是分子生物学实验的第一步。它是基因克隆、分子标记、杂交检测等多种实验的基础。
由于细胞中含有核酸、蛋白质、糖类、脂类、金属阳离子以及无机盐等成分,而DNA主要存在于核酸中,为了得到高质量和高纯度的DNA,就需要把其他干扰因素有效去除,使DNA受污染程度降到贼低。血液、组织、口腔黏膜细胞等不同类型的样本,所采用的DNA提取方法也有所差异。DNA,提取,蛋白质,DNA,提取,蛋白质,DNA,提取,蛋白质,
首先是裂解细胞,蛋白质变性,释放核酸,常用试剂为SDS、EDTA,也可以利用NaOH进行碱裂解;用蛋白酶K降解蛋白质,使DNA游离。然后利用酚/氯仿抽提DNA,其作用是去除未消化的蛋白质,用不同浓度的乙醇或异丙醇洗涤,去除其他离子。贼后利用TE缓冲液洗脱DNA,于-20℃存放。也可以利用吸附柱方法,特异性吸附DNA,高盐低PH结合核酸,低盐高PH洗脱DNA。
目前的分子实验室都会配有核酸提取仪,配合提取单个标本的独立分装试剂,操作过程中,只需要加入标本动作,仪器自动完成提取纯化的全过程,不需要加入提取过程中所需要的试剂过程,用于临床大批量样本基因组DNA 的提取,提高了通量,同时也减少了人力时间成本。
为了验证DNA质量,需要用分光光度计在260nm和280nm处测定DNA溶液的光吸收,A260与A280之比应在1.70-1.90之间。DNA 质量的好坏,甚至直接关系到后续实验的成败。
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