【佳学基因-基因检测】实时荧光定量PCR技术简介与应用
实时荧光定量PCR是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术,被广泛应用到生物学和医学的各个领域, 不仅涉及到对DNA的定量, 核酸多态性分析, 基因突变分析等,同时对染色体病的诊断、基因病的诊断、肿瘤研究以及用药评估方面都有广泛应用。肿瘤基因检测哪里做?
实时荧光定量PCR技术有很多优点,例如特异性好、正确性高、灵敏度高、可定量检测、 误差小、操作简单、自动化程度高、交叉污染和污染环境机会少等。 同时因不需杂交、电泳、凝胶成像。此外, 实时荧光定量PCR技术在动物检疫和环境监测等方面也得到了广泛的应用, 使人们的健康得到保障, 同时, 也可使人们深入探索微生物群落与环境因子之间的相互作用及其动态变化过程。肿瘤基因检测哪里做?
实时荧光定量PCR 包括探针类和染料类两种,探针类是利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加, 染料类如SYBR Green I 则是利用与双链DNA 小沟结合发光的理化特征指示扩增产物的增加对病原DNA 的检测。Taqman探针法是高度特异的定量PCR技术,其核心是利用taq酶的3’-5’外切核酸酶活性,切断探针,产生荧光信号。由于探针和模板是特异性结合,所以荧光信号的强弱就代表了模板的数量。
针对遗传病的基因突变,设计跨越突变位点的荧光探针,对跨越突变位点的一段基因进行扩增。扩增结束时,对产物进行缓慢加热以获得熔解曲线,根据熔解曲线判断是否有基因突变。肿瘤基因检测哪里做?
对某种基因型疾病实施药物治疗后,用实时荧光定量PCR 对相关基因是否转录或转录量的多少均可以快速正确的监控,对临床有重要指导意义。
癌基因的表达增加和突变在许多肿瘤早期和良性阶段就会出现, 实时荧光定量PCR不但能有效地检测基因的突变,而且能正确测定表达量,据此可进行肿瘤早期诊断、分型、分期和预后判断。
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